色谱法与色谱仪你想知道的都在这儿了

发布者:admin 发布时间:2019-10-22 22:20 浏览次数:

  《中华人民共和国药典》2015年版收载了上千个药品用色谱法进行纯度检查、定性鉴别或含量测定。色谱法是生命科学、材料科学、环境科学等科学领域的重要分析手段,在药物分析中有着极为重要的地位。

  色谱柱中固定不变的物质是固定相,携带样品向前流动的是流动相,色谱类型较多,从不同角度可以有不同的分类方法。

  流动相为气体的称为气相色谱,流动相为液体的称为液相色谱。固定相为固体的可分为气固色谱(GSC)或液固色谱(LSC),固定相为液体的有气液色谱(GLC)或液液色谱(LLC)。

  可分为分配色谱法、吸附色谱法、离子交换色谱法和空间排阻色谱法等类型,后两者只存在于 液相色谱中。

  另外,还有其他分离机制的色谱方法,如,毛细管电泳法,根据组分的电泳速度差异而实现分离。

  一种组分的色谱峰可用峰高或峰面积(用于定量)、峰位(用保留值表示,用于定性)及峰宽(用于衡量柱效)说明。

  ① 在操作温度下应呈液态,且蒸气压要很低,否则易造成固定液流失,使色谱柱寿命下降,检测器本底增高。

  ② 对各组分应有较高的选择性,即各组分的分配系数有较大的差异,从而获得良好的分离效果。③ 对分析样品中的各组分有良好的溶解能力。

  气相色谱仪的维护保养(1)严格说明书要求,进行规范操作,这是正确使用和科学保养仪器的前提。

  (4)确保载气、氢气、空气的流量和比例适当、匹配,一般指导流速以次为载气30mL/min,氢气30mL/min,空气300mL/min,针对不同的仪器特点,可在此基础上,上下做适当调整。

  (6)气源压力过低,气体流量不稳,应及时更换新钢瓶,保持气源压力充足、稳定。

  (7)新填充的色谱柱不能马上使用还需要进行老化处理,避免固定液流失,产生噪音。

  (8)注射器要经常用溶剂(如丙酮)清洗。试验结束后,立即清洗干净,以免被样品中的高沸点物质污染。

  (9)要尽量用磨口玻璃瓶作试剂容器。避免使用橡皮塞,因其可能造成样品污染。如果使用橡皮塞,要包一层聚乙烯膜,以保护橡皮塞不被溶剂溶解。

  (10)避免超负荷进样(否则会造成多方面的不良后果)。对不经稀释直接进样的液态样品进样体积可先试0.1uL(约100ug),然后再做适当调整。

  (11)对于欠稳定的农药、中间体,最好用溶剂稀释后再进行分析,这样可以减少样品的分解。

  (12)密封垫分一般密封垫和耐高温密封垫,汽化室温度超过300℃时用耐高温密封垫,耐高温密封垫的一面有一层膜,使用时带膜的面朝下。

  (13)保持检测器的清洁、畅通。为此,检测器温度可设得高一些,并用乙醇、丙酮和专用金属丝经常清洗和疏通。

  (14)保持气化室的惰性和清洁,防止样品的吸附,分解。每周应检查一次玻璃衬管,如污染,清洗烘干后再使用。

  (17)在使用微量进样器取样时要注意不可将进样器的针芯完全拔出,以防坏进样器。

  (18)进样口温度一般应高于柱温30~50度。检测器温度不能低于进样口温度,否则会污染检测器进样口温度应高于柱温的最高值,同时化合物在此温度下不分解

  (19)含酸、碱、盐、水、金属离子的化合物不能分析,要经过处理方可进行。

  (22)仪器要定期空走程序升温老化柱子,这样会提高柱子的使用寿命和降低仪器污染。

  与气相色谱法相比具有的优点:不受试样的挥发性和热稳定性限制,应用范围广;流动相种类多,可通过流动相的优化达到高的分离效率;一般在啊室温下分析即可,不需高柱温。

  拿到一根新柱时,一定要先看其使用说明,然后测柱效,定期检测柱效,保留在新色谱柱上得到的色谱图,并记录条件,定期检测仪器的谱带展宽,若应用于在线监测,应对色谱柱提供在线的物理保护和化学保护,例如采取安装在线过滤器,自装填料保护柱和预装保护柱等。在线过滤器的作用是防止颗粒在柱头累计,优点是基本不影响柱效,在需要高柱效的时候常用,常更换的消耗品是滤芯和垫圈。

  保护柱的作用是防止柱子被化学污染,缺点是多数保护柱影响色谱柱的柱效,特别是在用微柱时,常用的是普通自装填料的保护柱。最近新出的一些保护柱例如Sentry-guard保护柱,它的特点是高质量、高效填料、增加分析柱效、对脏样品载荷能力大,能延长保护柱的寿命,手可拧紧接头,安装时不需要工具,省时省,可换芯式设计,能采用各种不同的填料,主要适用于非常脏非常复杂的样品本底,例如,生化样品,环境样品和食品等,或者不想做太多的固相萃取,不想降低柱效果等情况。

  对所做的样品要有充分的了解,用对该样品洗脱能力最强的流动相清洗,对于硅胶柱,先用甲醇洗去极性杂质,然后用干燥的二氯甲烷和正庚烷100-200mL 依次活化,对于键和相柱,一般用甲醇-氯仿-甲醇-水依次冲洗, 每种色谱柱有特定的清洗方法, 一定要看其使用说明。

  存放前除去杂质和盐,采用合适的存放溶剂,避免色谱柱床的干枯,避免机械振动,防止细菌生长,注意存放的温度。

  可能是微粒堵塞,柱床膨胀,不可逆吸附,细菌生长等造成的。也有可能是系统反压问题,例如阻尼器堵塞,进样器堵塞,管路或连接口堵塞,在线过滤器不干净,压力传感器不准确等。

  可能是色谱柱被污染、过滤片部分堵塞、色谱柱内的死体积造成,例如,流动相pH值或者组成不合适造成固定相损失,流动相急剧变化造成固定相物理损坏,机械振动造成固定相产生裂缝,柱床收缩或干枯。也有可能是仪器连接的问题,认真检查进样器、检测器、管路、保护柱和在线过滤器等是否连接好,也可能是色谱柱没有平衡好,进样量过大等问题。

  可能是色谱柱被污染,流动相pH 值或者组成不合适造成固定相损失,样品溶剂不同或样品本身不稳定,固定相极性过强或者流动相极性过弱,或者发生非特异性吸附。也可能梯度实验时平衡时间不足,温度波动,流动相组成改变,样品溶剂不同,样品稳定性不好,方法的开发不好,缓冲液的酸碱度不合适或者缓冲能力不足。

  色谱法是先将混合物中各组分分离,而后逐个分析,因此,是分离分析复杂混合物有利手段,具有高灵敏度、高选择性、高效能、速度快、应用范围广等优点。

  [3]武开业.高效液相色谱仪使用及维护保养注意事项.科技信息,2010.

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