薄层色谱法工作原理

发布者:admin 发布时间:2019-10-27 13:34 浏览次数:

  

  薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法,它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同,使在流动相(溶剂)流过固定相(吸附剂)的过程中,连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附,从而达到各成分的互相分离的目的。

  薄层层析可根据作为固定相的支持物不同,分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。

  吸附是表面的一个重要性质。任何两个相都可以形成表面,吸附就是其中一个相的物质或溶解于其中的溶质在此表面上的密集现象。在固体与气体之间、固体与液体之间、吸附液体与气体之间的表面上,都可能发生吸附现象。

  物质分子之所以能在固体表面停留,这是因为固体表面的分子(离子或原子)和固体内部分子所受的吸引力不相等。在固体内部,分子之间相互作用的力是对称的,其力场互相抵消。

  灵敏度及分辨率高、分离快速、操作方便、同时分离多个样品、样品预处理简单、设备简单。

  由于这些特点,薄层色谱在实际工作中的应用十分广泛。由于通常用薄层色谱分析法进行定量分析的过程中,薄层扫描仪是最为重要的,因此对它进行略详的介绍。

  薄层扫描仪的基本结构及主要功能基本是相同的,每台仪器都包括光源、分光器、检测器、数据处理及信号输出几个部分。

  它保持了操作方便、设备简单、显色容易等特点,同时展开速率快,一般仅需15~20分钟;混合物易分离,分辨力一般比以往的纸层析高10~100倍。

  它既适用于只有0.01μg的样品分离,又能分离大于500mg的样品作制备用,而且还可以使用如浓硫酸、浓盐酸之类的腐蚀性显色剂。薄层层析的缺点是对生物高分子的分离效果不甚理想。

  推荐于2017-09-27薄层色谱又叫薄板层析,是色谱法中的一种,是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术,属固—液吸附色谱,它兼备了柱色谱和纸色谱的优点,一方面适用于少量样品(几到几微克,甚至0.01微克)的分离;另一方面在制作薄层板时,把吸附层加厚加大,因此,又可用来精制样品,此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的质。此外,薄层色谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的一种“预试”。

  薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示,又称薄层层析,属于固-液吸附色谱。是近年来发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法,它兼备了柱色谱和纸色谱的优点。一方面适用于小量样品(几到几十微克,甚至0.01μg)的分离;另一方面若在制作薄层板时,把吸附层加厚,将样品点成一条线mg的样品。因此又可用来精制样品。故此法特别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物资。此外,在进行化学反应时,常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。

  薄层色谱是在被洗涤干净的玻板(10×3cm左右)上均匀的涂一层吸附剂或支持剂,带干燥、活化后将样品溶液用管口平整的毛细管滴加于离薄层板一端约1cm处的起点线上,凉干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的展开槽内,浸入深度为0.5cm。待展开剂前沿离顶端约1cm附近时,将色谱板取出,干燥后喷以显色剂,或在紫外灯下显色。记下原点至主斑点中心及展开剂前沿的距离,计算比移值(Rf):

  薄层色谱法简称TLC,是在50年代从经典柱色谱法和纸色谱法基础上发展起来的一种色谱技术。60年代后,人们对薄层色谱法的标准化、规范化及扩大应用等方面进行了许多工作,使该方法日趋成熟。

  然后将薄板的这一端浸入流动相,在流动相浸湿薄板的过程中,样品随着流动相被展开,不同的组分随流动相以不同的速度向前移动,最终保留在薄板上的不同位置,从而达到分离的目的;

  此时的固定相被称为载体或吸附剂,而流动相被称为展开剂,被展开的样品叫做斑点。

  灵敏度及分辨率高、分离快速、操作方便、同时分离多个样品、样品预处理简单、设备简单。由于这些特点,薄层色谱在实际工作中的应用十分广泛。

  由于通常用薄层色谱分析法进行定量分析的过程中,薄层扫描仪是最为重要的,因此对它进行略详的介绍。

  薄层扫描仪的基本结构及主要功能基本是相同的,每台仪器都包括光源、分光器、检测器、数据处理及信号输出几个部分。

  典型的检测方法是吸收检测法,其基本测定原理为,用一束长宽可以调节的一定波长、一定强度的光照射到薄层斑点上进行整个斑点或被斑点反射的光束,根据光束被斑点吸收后强度的变化来确定组分的含量。 薄层色谱法的优点特别适合我国国情,已成为许多实验室不可缺少的分离手段。该方法在科研、教学、临床、生产等各个领域中广泛应用,分离对象也无所不包。已赞过已踩过你对这个回答的评价是?评论收起匿名用户

  2013-06-24薄层色谱法(thin一layer。hrornatography, TLC)一种在薄层板上进行色谱分离和分析物质 组分的色谱分析方法.薄层板上涂有一层固定相,通常 是把一种惫浮在合适溶剂中的吸附剂均匀地涂布于玻 瑞板或金属板上,干燥后即成。最常用的吸附剂为硅 胶、暇化铝和纤维索等.分析时,先将样品溶液点在薄 层板的一端附近(这一过程称为点样)。然后把薄层板 的这一端浸入作为流动相的溶剂系统中,使样品原点 附位于液面上方。流动相通过毛细管作用沿板上升,带 动样品物质向上移动(这一过程称为展开).由于样品 各组分在固定相及流动相中有不同的吸附、溶解等能 力,在展开过程中,经过固定相及流动相对组分的吸 附、解吸等反复作用,使各组分在薄层板上表现出不同 的移动速度从而得到分离. 通过比较分离后的斑点移动的距离可对样品进行 定性分析,常以Rf值作为比较的参数.Rf值定义为斑 点中心移动的距离与溶剂自样品原点至前沿移动的距 离的比值。由于影响Rf值的因素较多,Rf值常随实验 条件的不同而变化。因此需在分析样品的同一块薄层 板上点上标准样品才能进行有效的鉴定. 样品经展开得到分离后,只有有色物质的斑点能 在薄层板上直接观察到,大多数分离后的斑点偏经过 适当的处理后才会显现出来。主要的方法有:①喷以适 当的显色剂,使斑点显色.②紫外灯下观察能发射荧光 的物质斑点。③在涂有荧光指示剂的薄层板上,观察紫 外光照射下斑点处的荧光熄灭.④在无机吸附剂的薄 层板上喷洒硫酸或加热.使有机物质斑点炭化. 薄层色谱法原先主要用于定性分析,随着薄层色 谱扫描仪的出现,使薄层色谱法与其他色谱法一样能 够进行定量分析.这种扫描仪的工作原理是以反射光 法或透射光法对斑点进行扫描,将斑点的颜色(或荧 光)强度转换成峰面积进行定t分析. 薄层色谱法的特点有:①灵敏.可检侧10一‘~l犷, 克物质。②分离迅速。展开所需时间约15~60分钟. ③样品用量少。仅需几个徽升。④设备简单、操作容易。 ⑤可提纯样品,制备标准样品。 薄层色谱法在农业科学、食品工业、医药卫生、环 境保护等领域中有广泛的应用。可用来分离和测定农 药残留量、黄曲排素、氨基酸、磷脂类化合物、生物碱、 花青素、有机酸、街类化合物、植物激素以及徽量金属 离子等。已赞过已踩过你对这个回答的评价是?评论收起匿名用户


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