薄层色谱法注意事项

发布者:admin 发布时间:2019-10-27 13:34 浏览次数:

  薄层色谱法注意事项_临床医学_医药卫生_专业资料。薄层色谱法检验注意事项 定义 薄层色谱法系指以适宜的固定相涂布于玻璃 板、铝箔片或聚酯薄膜上使成一均匀的薄层, 将供试品与相应的对照物点于薄层板的一端, 以适宜的溶剂置展开容器内展开,使供试品 所

  薄层色谱法检验注意事项 定义 薄层色谱法系指以适宜的固定相涂布于玻璃 板、铝箔片或聚酯薄膜上使成一均匀的薄层, 将供试品与相应的对照物点于薄层板的一端, 以适宜的溶剂置展开容器内展开,使供试品 所含的相应成分分离,采用适宜的显色剂或显 色方法显色,将供试品色谱与对照物色谱相 比较,或采用薄层扫描仪扫描,以进行鉴别、 检查或含量测定的方法。 2 薄层板的制备 ? 将1份固定相和3份水(或加有黏合剂如0.2~ 0.5%羧甲基纤维素钠水溶液)在研钵中向同一方 向研磨混合,去除表面的气泡后,倒入准备好的玻 璃板上,用洁净玻棒涂铺成一个均匀的薄层,再稍 加振动,使整板薄层均匀。 0.2~0.5%羧甲基纤维素钠溶液:称取2—5g羧甲基纤维 素钠,加1升水煮沸溶解,过滤, 静置,用时取上清液。 110℃活化30分钟,即置有干燥剂的干燥箱中备用。 ? ? 3 点样 ? 圆点点样直径为2~3mm,(高效薄层 板一般不大于2mm),点间距离可视斑 点扩散情况以不影响检出为宜,一般为 1.0~2.0cm .点样基线 点样 ? 尽量用小的点样管。如果有足够的耐性,最好只用1微升的点样管。这样, 点的斑点较小,展开的色谱图分离度好,颜色分明。样品溶液的含水量越 小越好,样品溶液含水量大,点样斑点扩散大。样品溶液的溶剂一般是无 水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或 放入干燥器里晾干。 薄层色谱用于定量时,点样是最主要的误差来源。 供试液的溶剂均有不同程度的洗脱力,所以在点样的同时,样品在原点就 可是成环形展开,原点直径的扩散促进了这种展开,Kaiser称之为“上样 环形色谱效应”。如果样品在溶剂中的溶解度很大,原点将变成空心环。 这种效应对随后的先行展开造成很不利的影响。 供试液的溶剂在原点的 残留,也会改变展开的选择性,特别是供试液的溶剂与展开剂的极性相差 较大时更明显。再者,亲水性溶剂残留在原点吸收大气中的水分(特别在 高湿度环境)对色谱的影响也不可低估。因此点样时的同步干燥或继后干 燥以除去原点残存的溶剂是需要的。但应尽可能避免高温加热,如用吹风 筒加热,样品变为固态后,部分或全部强烈的吸附在吸附剂的颗粒上,而 促进了硅胶的有催化作用的活性表面故态化学反应,导致样品的变性(尤 其热不稳定物质),至少移动相在展开时对这部分样品的溶解速度比移动 速度慢得多而形成拖尾(斑点拖尾的原因之一)。 5 展开 ? 浸入展开剂的深度为距原点5mm(切 勿将样点浸入展开剂中),上行展距一 般为8~15cm,高效板上行展距为5~ 8cm. 若展距过长,各个物质的分离更大,能够 提高分离效果。但是斑点的扩散也更大, 影响了斑点的集中。 ? 6 展开剂的配置 ? 选择合适的量器把各组成溶剂移入分液 漏斗,强烈振摇使混合液充分混匀,放 置,如果分层,取用体积大的一层作为 展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入 展开缸,振摇展开缸来配制展开剂。混 合不均匀和没有分液的展开剂,会造成 层析的完全失败。各组成溶剂的比例准 确度对不同的分析任务有不同的要求, 7 展开系统的饱和 ? 一般使用的是双槽的展开缸,一槽用来放展开剂, 另一槽可加入氨水或硫酸。把待展开的板放入两槽 间的平台,斜架着,盖上展开缸的盖子。让展开剂 的蒸气充满展开缸,并使薄层板吸附蒸气达到饱和, 防止边沿效应,饱和时间在半个小时左右。展开时 难免要打开盖子把薄层板放入展开剂中,不过对薄 层板与蒸气的吸附平衡影响不大,当然动作应该尽 量轻、快。 8 温湿度的控制 ? 温湿度的控制 温湿度对薄层影响都很大。 不冻结的前提下,通常温度越低分离越 好,较难的分离需在低温下分离,例如 人参皂苷。湿度的影响,估计主要是影 响薄层板的吸附能力,导致选择性(容 量因子)的变化,湿度应根据实际情况 确定。温度控制使用空调器或冰柜,湿 度控制是通过在另一展开槽放置相应浓 度的硫酸。 9 薄层扫描法——定义 ? 系指用一定波长的光照射在薄层板上, 对薄层色谱中可吸收紫外光或可见光的 斑点,或经激发后能发射荧光的斑点进 行扫描,将扫描得到的图谱及积分数据 用于药品的鉴别、检查或含量测定的方 法。 10 薄层扫描法——供试品制备和点样 ? 供试品溶液至少制备2份,,供试品 溶液和对照品溶液应交叉点于同一 薄层色谱板上,供试品点样不得少 于2个,对照品溶液每一浓度不得少 于2个。 11 薄层扫描法——点样 ? ? 根据实际情况,可调整供试品溶液与 对照品溶液的点样量,以便测定。 待测成分斑点与相邻斑点的分离度至 少在1.0以上,背景干扰尽量小。 12 以上介绍供参考! 谢谢! 13


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