分类薄层色谱法

发布者:admin 发布时间:2019-10-30 09:43 浏览次数:

  20192019--22--26 26 2019 2019--22--26 26 一、分类 薄层电泳法;2019 2019--22--26 26 纸层析和薄层层析也属于色谱分析法。但与其 它色谱方法不同的是在分离过程中一般不使用 动力源。纸层析和薄层层析流动相的移动是依 靠毛细作用。 2019 2019--22--26 26 将试样点在色谱滤纸或层析板的一端,并 将该端浸在作为流动相的溶剂(常称之为 展开剂)中,随着溶剂向上的移动,经过 试样点时,带动试样向上运动。原理与柱 色谱相同。 2019 2019--22--26 26 值在0.2-0.8之间一般,在0.3-0.5之间最佳(一)定性参数: 比移值:溶质移动距离与流动相移动距离之比 20192019--22--26 26 (二)相平衡参数 分配系数和容量因子 R’——流动相中停留的时间分数,单位时间内一个分子在流动相中出现的几率。 20192019--22--26 26 (三)面效参数: 理论塔板数 n=16(L/W) (四)分离参数:分离度:R=(L 分离数SN:(R=1.177时)R =1容纳斑点数SN=L 是通过测定其它组分的Rf值和半峰宽,二者在一定点样量范围内成直线关系,用回归方程求得。 Rf=0时组分的半峰宽 Rf=1时组分的半峰宽 2019 2019--22--26 26 一、类型:吸附色谱、分配色谱 1、吸附色谱:固定相为吸附剂。A、B两组分在 薄层板上经过--- 再吸附再吸附 再解吸 再解吸 吸附 由于两组分在固定相的吸附能力不同,展开剂对 两组的溶解能力的不同,即吸附系数不同,移动 速度不同。极性大的组分迁移速度慢,R 20192019--22--26 26 2、分配色谱: 利用试样中各组分在固定相与流动相之间的分配系数的 不同,各组分在板上的迁移速度不同而获得分离的薄层 色谱法。 正相色谱:流动相的极性比固定相的极性小。 例:Si-OH表面吸附17%水为固定相, 极性较强,流动相用弱极性溶剂正相分配色谱。 极性大的组分R 反相色谱:流动相的极性比固定相的极性大。极性大的组分R 20192019--22--26 26 (一)吸附剂(层析板):吸附色谱固定相, 用专门的涂布器把浆状的吸附剂(硅胶或氧化铝, 10~40m)均匀地涂在长条形玻璃板上(厚度0.15~ 0.5mm),干燥活化后即可使用。 SiSi— —OO— —HH 极性基团 各组分的极性基团与硅醇基形 成氢键的能力不同而被分离 氢键 吸附中心 吸附中心 2019 2019--22--26 26 活化去水,增加吸附位点。 2、氧化铝: 氧化铝 酸性 中性 碱性 pH4.0 pH7.5 pH9.0 2019 2019--22--26 26 活性级 硅胶含水量% 氧化铝含水量% 2510 3815 活化去水,增加吸附位点。 2019 2019--22--26 26 20192019--22--26 26 制备:涂板,活化,样品处理 点样:用微量注射器或玻璃毛细管吸 取一定量试样 点在原点上。试样点的直径 一般应小于5mm。可并排 点多个试样同时展开。 (2-4mm,0.01-0.1%, nmL) 2019 2019--22--26 26 展开:随时间t延长,展开速度变慢边缘效应,先饱和. 显色、检测:有些组份在紫外光照射下产生荧光,可在紫外灯下用铅笔将组份斑点描绘出 来。常用的显色方法有喷洒显色剂、碘蒸气 熏或氨水熏等。 2019 2019--22--26 26 20192019--22--26 26 五、高效薄层色谱法 吸附剂颗粒小,n大,R高 六薄层扫描 线形扫描: 斑点规则, 浓度均匀。 2019 2019--22--26 26 曲折形扫描: 斑点不规则,浓度不均匀。 2019 2019--22--26 26 一.纸色谱法的分离原理:分配色谱 纸——载体。吸附水为固定相,正相色谱 2019 2019--22--26 26 平板色谱简单、方便、及操作费用低, 可以在一块层析板上同时展开多个试样及 将多条滤纸同时展开。 采用方形薄层板还可以方便的进行二维展开即按一般方法展开后,改变方向和展开剂 再次展开,进一步改善分离效果。 试样一般不需要经过预处理即可分离。 2019 2019--22--26 26 应用: 平板色谱法在染料、农药、医药、有机酸碱类 化合物、糖类化合物、氨基酸、蛋白质及中 草药中有效成分的分离分析中经常被使用。 也可以用于无机离子的分离。还经常作为高 效液相色谱的一种预试方法。 分离效率较低,不适用挥发性试样分离。定性定量不便。


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