高效薄层色谱法(HPTLC)简介和薄层色谱的应用

发布者:admin 发布时间:2019-10-30 09:43 浏览次数:

  高效薄层板一般为商品预制板,由颗粒直径5~7um的固定相,用喷雾法制成板。常用的有硅胶、氧化铝纤维素和化学键合相薄层板。从表8-10列出的高效薄层色谱和普通薄层色谱的薄层板的比较可以看出,高效薄层板较普通薄层板颗粒直径小,颗粒度分布窄,分辨率提高,展开距离缩短,因而展开时间缩短,3~20min可以完成一次分析。HPTLC较常规TLC分离度、灵敏度和重现性提高,适用于定量测定。

  在定量检测上,一般使用薄层色谱扫描仪来完成,薄层色谱扫描仪是对展开的斑点进行扫描测量的光密度计。其原理是用一定波长、一定强度的光束照射薄层上的斑点,用仪器测量照射前后光束强度的变化,测量方法可以分为透射光测定、反射光测定及透射光和反射光同时测定三种。扫描所用的光线可以用可见光、紫外光和荧光三种。它可以有多种扫描方式如单光束扫描、双光束扫描和双波长扫描。

  薄层分析的误差包括四个方面:点样误差、展开误差、定位误差和检测误差。采用自动点样器控制点样误差;采用预制的高效薄层板以提高铺板的均匀性和样品展开效果;采用双波长锯齿扫描,也能有效降低展开误差;斑点的扩散、拖尾等产生定位误差,需要有好的样品预处理方法和优化展开系统来减小,检测误差的减小需要精密的先进的仪器系统支持。

  薄层色谱法的优点是设备简单,操作方便,分离效率和检出灵敏度都比较高。它的所有步骤是独立的,方法的灵活性高。薄层板是一次性使用的,和高效液相色谱相比,样品基质对固定相的污染不成为问题,样品的预处理相对较简单。一次可以将多个样品和标准样品同时点样进行展开,因此效率高,单个样品的分析成本低。它可以用于小量样品(几到几十微克,甚至0.01ug)的分离;在制备薄层中可分离多达 500mg的样品。基于这些特点,薄层色谱法在医药、生物、环境、食品等方面有着广泛的应用,例如:用于各种天然和合成有机物的分离和鉴定及小量物质的精制;在药品质量监控中,用于测定药物的纯度和检查降解产物,对中药材和中成药,可鉴别有效成分,进一步进行含量测定;在合成工艺中用作监控分析的手段;还可用于环境有害物质的分析、食品的天然营养成分和食品添加剂及某些真菌毒素如黄曲霉毒素的分析等。

  薄层色谱应用实例:食品中红曲色素的测定(GB/T 5009.150-2003)。试样中的红曲色素经提取,净化后,薄层分离,与标准样品比较,定性。红曲色素标准品是将1g红曲色素溶于30mL甲醇,通过50g硅胶色谱柱(湿法装柱)纯化,收集甲醇洗脱液,减压浓缩,于60~70℃烘干制得。配制标准使用液0.1 mg/mL。样品豆腐乳的处理方法:取豆腐乳30g,加95%的乙醇50~70mL,提取回流30min,过滤,收集滤液,减压浓缩至20mL。点样:取市售预制硅胶GF254板(4cm×20cm)2块,每块在离底边2cm处点试样10uL,左右两边各点2uL标准使用液。分别以展开剂l甲醇,展开剂2正己烷+乙酸乙醋+甲醇(5+3+2),展开至前沿到15cm处,晾干。在UV 254nm下观察,展开剂1得到4个点,Rf值分别为0.86、0.71、0.54、0.38,展开剂2得到3个点,Rf值分别为0.86、0.69、0.57。试样与标准品的斑点的Rf值一致。证明试样的色素为红曲色素。


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